Soovime doonorvektorilt saada inserti ja akseptorvektorilt lühikest juppi eemaldada. Selleks lõikame huvipakkuvad fragmendid DNA’st välja ja puhastame DNA agaroosgeelist. Kaalume enda väljalõigatud osa ja lisame sellele ADB puhvrit. Inkubeerime 55 kraadi juures kuni kogu geel on sulanud ja lahus on homogeenne. Seejärel pipeteerime kõik segu ränikolonni, DNA jääb räni külge. Tsentrifuugime. Valame kogumistopsist puhvri ära ja peseme 2 korda pesupuhvriga. Seejärel lisame elueerimispuhvrit ja tsentrufuugime uuesti. Nüüd saime tulemusekt inserdi ja aktseptorplasmiidi. 3. Järgneb ligatsioon. Võtame vektorit ja inserti suhtes 1:3 ja lisame segule T4 DNA ligaasi ja ligeerimispuhvrit ja MQ’d. Ligeerime 4 kraadi juures üleöö. Kõrvale teeme ka kontroll-proovi mis sisaldab ainult vektor+ligaasi + puhver, ilma inserdita. 4
2. Eelnevalt kaalusin tuubi (1,01g), panin selle tuubi sisse oma geelitükk, ning kaalusin neid kokku. Sain, et lõiku kaal on 1,18g – 1,01g = 0,17g. 3. Lisasin 0,1g geeli kohta 0,3 ml, ehk 17*0,3 = 0,51ml = 510 µl ADPd (Agarose Dissolving Buffer), mis lahustab geeli, ning panin inkubeerida 55 C 5 juures geeli täeliku sulamiseni. Vahepeal nipsutasin tuubi, et kiirustada sulamist. 4. DNA – geeli – puhveri segu pipeteerisin Zymo-SpinTM kolonni (mis oma korda koosneb kolonnist ja kogumistopsist. Kolonn sisaldab ränifiltri, läbi mille me laseme oma segu jooksma. DNA seostub räniiksiidi osakestega, sellega ta ei saata kogumistopsi, vaid jääb kolonni filtri peale. Kolonni saagis minu DNA lõigule on vahemikus 70-90%) ja tsenrifugeerisime 30sek ja viskasin läbivoolatud puhver välja. 5. Lisasin 200µl pesupuhvrit ja jalle fuugisin 30 sek x2 korda, et olla kindel, DNA on puhas. 6. DNA elueerimiseks kasutasime MQ vett, mille pH oli > 6.0 (teisel juhul, DNA võib kahjustuda)
annaabi.ee 
