Vajad kellegagi rääkida?
Küsi julgelt abi LasteAbi
Logi sisse
Sulge

"geelipildil" - 2 õppematerjali

Molekulaar- ja rakubioloogia
22
doc

Molekulaar- ja rakubioloogia

3. Valada 100 ml TAE geeli ­ kontsentratsioon valida oodatavate produktide suuruse järgi 4. Kui 30 minutit on täis, tsentrifuugi uuesti oma kontrollrestriktsiooni, et kokku koguda kaanele kogunenud veetilgad 5. Lisa 2 l 6x DNA värvi ning pipeteeri segu agaroosgeeli hambasse 6. 10-15 minuti järel tee geelist pilt ning analüüsi c. i. Tühja plasmiidi lõikamisel oleks bändide pikkused 17 bp (mida on geelipildil praktiliselt võimatu näha, kui kontsentratsioon pole just väga kõrge) ja 3566 bp. Kui insert on sisenenud, on tekkinud bändide pikkused 360 bp ja 3566 bp. Pildilt on näha kahte bändi kõrgemal, kui 3000 ­ üks on ilmselt õige pikkusega bänd (3566) ja teine ilmselt terve plasmiid, mis on jäänud lõikamata (näiteks seetõttu, et lõikamisaeg oli liiga lühike või tingimused polnud optimaalsed). Lisaks on heledalt näha lõiku

Bioloogia → Molekulaar- ja rakubioloogia...
169 allalaadimist
Molekulaarbioloogia aruanne
36
docx

Molekulaarbioloogia aruanne

kuumutasime mikholaineahjus sulamiseni. Jahtunud geelisegule lisasime1 μl EtBr, mida kasutatakse DNA visualiseerimiseks. Valasime lahus geelialusele ning jätsime tarduma järgmise praktikumini. 2. päev: lisasin PCR segule 4 μl 6x DNA värvi, et DNA nähtav oleks, ning kandsin kogu segu TAE geelile (hambasse). DNA lahutamine toimub elektrivoolu toimel (100 V 15 min) 25. 26. 27. 28. 29. 30. Kuna minu produkt ei ole üldse geelipildil nähtav, võin järeldada, et midagi tegin valesti PCR reaktsiooni teostamisel (nt. viga pipeteerimisel või mingi muu viga). Sain geelitükki teiste plasmiidi ja praimeritega. 31. Plasmiid mEB1 pEGFP-N1, praimerid mEB1F ja mEB1R. Oodatav pikkus – 700 aluspaari. 32. 33.PCR produkti puhastamine geelist Zymoclean kitiga. 34. Eesmärgiks on puhastada välja PCRi segust meid huvitav produkt, et vältida praimerite, nukleotiidide või erinevate soolade mõju järgmisele etapile

Bioloogia → Molekulaar- ja rakubioloogia...
81 allalaadimist


Sellel veebilehel kasutatakse küpsiseid. Kasutamist jätkates nõustute küpsiste ja veebilehe üldtingimustega Nõustun