valasime tagasi puhvri pudelisse. 5. Võtsime geeli aparaadist välja, ettevaatlikuslt eraldasime klaasplaadid teineteisest. 6. SDS-i eemaldamiseks pesime geeli veega 10 minutit, loksutasime geeli veega, vahetades vett 10 min jooksul 3 korda. 7. Panime geel ööseks Coomassie G250 värvilahusesse. 8. Valasime värvilahus tagasi purki. Seleks, et bändid taustast ilusasti eristuksid geeli pesti korduvalt veega. 9. Pildisasime geeli. Tulemused : Figure 2 Geelipilt Geelipildi analüüsiks kasutasin Paint programmi. Kuna EPGluC bändi asukoht on kahtlane, kalibreerimisgraafiku koostamiseks kasutasin redeli bände. Leidsin iga bändi asukoha, kasutades navigaatori, sellega sain nende migreerumisteepikkused (pixelites). Kandsin tulemused tabelisee : Migreerumistee Molekul pikkus, px ide mass, kDa 20 200 38 150
peaksime puhvritega jändama, kuna iga restriktaasi jaoks on erinevat soolakontsentratsiooni vaja. Mida silmas pidada kui kasutada mitut erinevat restriktaasi korraga? Millised lõikamiseks sobivad tingimused võivad erineda? Peame vaatama, mis puhvrit kasutame. Erinevatel restriktaasidel on erinevaid soolakontsentratsioone vaja. Samuti tuleks jälgida mis temperatuuri juures need restriktaasid töötavad. Enamusele sobib temperatuus 37 kraadi. Kontrollrestriktsiooni geelipildi analüüs. Minu restriktsioon õnnestus, kuna näeme, et eraldunud bänd on kuskil 600- 700bp, mis peakski nii olema. Rajal ei ole näha teisi segavaid bände ehk restriktaas ei ole kuskilt mujalt lõiganud. Praktiline töö nr.9: Bioinformaatiline sekveneerimise tulemuste analüüs Eesmärk: Kloneeritud plasmiidi sekventsi analüüs ja ümberkloneerimise plaani koostamine Töö käik ja analüüs: 14 Mina valisin DST_T7_E10.ab1 failist sekventsi