Jätsime geeli polümeriseeruma. 5. Sellel ajal valmistasime proovid ette. Segasime omavahel valgulahust ja 2x laadimispuhvrit (15 µl : 15 µl). Inkubeerisime denatureerimiseks 95oC juures 5 minutit. Jahutasime jäävannis. 6. Proovide jahutamise ajal asetasime geel foreesiaparaati. Täitsime puhvrikambrid jooksupuhvriga (0,25 M TRIS, 1,92 M glütsiin, 0,1% SDS, pH 8,3), eemaldasime ettevaatlikult kammi ning pesime moodustunud geelitaskutest välja polümeriseerumata geelilahuse jäägid (kasutades jooksupuhvrit ja süstalt). Forees 1. Kandsime ettevalmistatud valguproove ettevaatlikult geelitaskutesse (20 l). Protokollisime, millisesse taskusse, millise proovi kandsid. 2. Asetasin foreesivannile kaasi, ühendasime juhtmed vooluallikaga ning lülitasime vooluallikas sisse (pinge 180V, voolutugevus 30 mA). NB! Täida elektriaparaatidega töö ohutuseeskirjasid! 3
4. Samal ajal kui geel jahtub, otsi välja vajaliku suurusega kammid ja aseta need geelialusele ettenähtud kohta. Jälgi, et kammi alumise otsa ja geelialuse vahele mahuks piisav kogus geeli, et tekiks tugeva põhjaga geelihammas. 73 5. Kui agaroosilahus on jahtunud umbes 55ºC- ni, lisa EtBr lahust ning vala geel alusele. NB! Kasutades plastikust geelialuseid on oluline jälgida, et geelilahuse temperatuur langeks alla 60°C. Kuumemad lahused lõhuvad geelialuse. Vala aeglaselt ja väldi õhumullide teket geelis. 6. Oota kuni geel on täiesti tardunud, eemalda ettevaatlikult kamm ja geelialuse otstest teip. Aseta geel foreesivanni. 7. Lisa foreesipuhvrit, et see kataks geeli umbes 2-3 mm. 8. Lisa DNA proovile umbes 0,2 mahu ulatuses värvainet (loading dye). 9. Kanna proov aeglaselt hambasse. Kindlasti kanna geeli äärmistele radadele ka suurusmarker. 10
annaabi.ee 
