35. Plasmiid mEB1 pEGFP-N1, praimerid mEB1F ja mEB1R. Oodatav pikkus – 700 aluspaari. 36. Puhastamine: 1. Saadud geelitükk kaalus 0,04 g. Lisasin 120 μl ADB-d (0,3 ml 0,1 g geeli kohta) 2. Inkubeerisin 37 °C juures 5 minutit, et geelitükk oleks täielikult sulanud 3. Pipeteerisin segu kolonni, mis on omakorda kogumistopsis. Tsentrifuugimine – 30 sek, et kogu lahus jookseks läbi kolonni. Visasin läbivoolatud puhver kolonnist ära. 4. Pipeteerisin peale 200 μl pesupuhvrit. Fuugimine – 30 sek, visasin läbivoolatud puhver kolonnist ära (seda etapi tuleb korrata 2 korda) 5. Järgmisena pipeteerisin kolonni keskele 10 μl MQ vett (elueerimiseks). Vett saab kasuta ainult juhul, kui selle pH > 6,0. 6. Jälle fuugimine 1 minuti jooksul – praimerite, nukleotiidide ja erinevate soolade eraldamine. Epsis on elueerinud PCRi produkt, mis on valmis edasiseks ligeerimiseks. 37. 38. 39. 40. Kontrollgeeli pilt
2). [4] 5 Piim Piima Pastörisee Homogeni valmimine ri-mine - seerimine Termiseeri Normalise Bakto- Kalgen- -mine e-rimine fuugimine damine Koor Mikro Vadak o-bid Joonis 2. Piima eeltöötluse skeem (rasvase noolega on tähistatud eeltöötluse kõige levinumate operatsioonide järjestus) Eeltöötluse operatsioone kombineeritakse vastavalt vajadusele ja neid sooritakse enamasti kindlas järjekorras. Valmida lastakse piimal sageli enne normaliseerimist,
Rakkudega töötades on vaja tagada steriilsed tingimused ja kasutada aseptilist tehnikat, töötada puhta laminari all! Pipeteerisin 15 ml tuubi 5 ml söödet ja 6 cm tassile 4 ml söödet. Võtsin külmast krüoviaaliga NIH3T4 rakud ja sulatasin käes kiirelt (DMSO!) Lisasin viaali 0,5 ml sooja söödet ja tõstsin rakud 15 ml tuubi ringi. Fuugisin rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (tegemis on õrna rakkudega, seega fuugimine peab olema madala kiirusega) Tõmmasin sööde vaakumpunbaga nii, et rakud jäid põhja Tassilt tuubile rakkudega lisasin 0,5 ml söödet, suspendeerisin ning panin tagasi tuubist tassile, ühtustasin rake ja panin tass CO2 inkubaatorisse, kus tingimused – temperatuur, rõhk ja CO2 % onn sarnased tingimustega organiismi sees, eh 37 °C ja CO2 5% - stabiliseerib pH. 2. Praktikum – rakkude paljundamine
annaabi.ee 
