VAADELDAV VALK: Forkhead box protein O3 Transkriptide võrdlus Homo Sapiens FoxO3 järjestusega Kattuvad Organism Järjestuse ID Pikkus järjestused Identsed alused Tühikud Pan troglodytes Simpans ref|XM_003311514.2| 7946 1 7076/7133(99%) 18/7133(0%) Sumatra Pongo abelii Orangutan ref|XM_002817219.2| 7812 1 7190/7343(98%) 46/7343(0%) Gorilla gorilla
Filter laseb läbi ainult kindla lainepikkusega valgust, mis on sobiv fluorokroomi ergastamiseks. Emiteeritud valgus sorteeritakse palju tugevamast ergastavast valgusest teise filtri abil. 160. Oma rakkude vaatlemiseks kasutame 60x õliobjektiivi, mille kasutades tuleb esmalt katteklaasile lisada tilk immersiooniõli. 161. Vaatlesime rakke rohelises, punases ja sinises kanaalis. 162. 163. 1. pilt: pEGFP/FoxO3a-ga transfekteerunud rakud. Roheline – FoxO3 liitvalk, mis asub tsütoplasmas. On näha ka tuumad. 2. pilt: Mouse anti tubuliin ja goat anti Mouse Alexa568-ga värvitud rakud. On näha mikrotuubuleid. Punane – sekundaarse antikeha küljes olev fluorokroom Alexa568. Number 568 näitab lainepikkust nmeetrites (absorb 578 nm ja emit 603 nm) 3. pilt: Tripleband filtriga tehtud pilt. Sinine – fluorestseeruv värv DAPI, mis värvib DNAd. On näha tuumad. Neeldumismaximum 461 nm juures. 164
• Asetada katteklaas (rakud allpool) sulundamislahuse tilga sisse, vältides mulli tekkimist • Lasta kuivada ja säilitada pimedas (valgustundlik!) Kolmas päev – fluorestsentsmikroskoopia Oma rakkude vaatlemiseks kasutame 60x õliobjektiivi, mille kasutades tuleb esmalt katteklaasile lisada tilk immersiooniõli. Vaatlesime rakke rohelises, punases ja sinises kanaalis: Figure 4. pEGFP/FoxO3a-ga transfekteerunud rakud. Roheline – FoxO3 liitvalk (ekspresseerub koos EGFPga. Liitvalk asub nii tsütoplasmas kui ka tuumas, kuna ta on transkriptsiooni vaktor. Tuumas signaal on tunduvalt tugevam, mis on täesti oodatav. FoxO3a on transkripstiooni faktor, valk on reguleerib apoptoosi ja kaitseb raku oksüdatiivse stressi eest. On näidatud, et valgu madal ekspessioon on seotud tumorgeneesiga. tugmeva Figure 5 Primaarse antikehaga mouse anti tubuliin ja sekundarse antikehaga (goat anti Mouse
annaabi.ee 
