analüüsiks. Rnaas H: Lõhustab heterodupleksis (RNA/DNA) olevat RNA. Tulemusena moodustub üheahelaline DNA. Nukleaas S1: Lõhustab üheahelalist DNA ja RNA, moodustades 5´fosforüülitud mono- ja oligonukleotiide. 5. Millised omadused peavad olema plasmiididl, et ta saaks toimida kui kloonimise vektor? Antibiootikume resistentsust kodeeriv geen (ampitsiliin või tetratsükliin Väike suurus Kloonimise site (MCS), koht kuhu viiakse järjestuse sisse (plasmiidi ala) Sisene inaktivatsioon (insertional inactivation) Alfa-komplimentaarsus 6. Too 1 selektiivse markeri näide, mida saaks kasutada plasmiidi sisaldava bakteri registreerimiseks/identsifitseerimiseks X-Gal värvib sinisteks rakud, mis ei sisalda huvipakkuva järjestuse, valged on need,
°C 30 min jooksul 2. Kui 30 min on täis, fuugisin uuesti, kuna sooendamisel kaanele kondenseerus veeaur. Lisasin 2 μl 6x DNA värvi 3. Elektroforeesiks valasime 100 ml TAE geeli (1%) 4. Pipeteerisin kogu oma segu agaroosgeeli hambasse. 5. Tehtud pildist oli arusaadav, et ma ei saanud õige kõrgusega bändi. Nagu selgus, viga oli bakterite kasvamisel ja meil kasvanud bakterite kolooniad polnud tegelikult õiged. Võib olla põhjus selles, et ampitsiliin polnud nii effektiivne ja selektiivne. Need bakterid võiksid sattuda meie tassidele õhust, kuna selles praksiruumis tehakse töid paljude teiste preparaatidega. 63. 64.Sekveneerimise tulemuste analüüs 65. Tavaliselt kontrollitakse saadud plasmiidi kasutades Sangeri meetodit. See meetod põhineb PCR reaktsioonil kuhu on lisaks tavaliste nukleotiidalustele lisatud ka selliseid aluseid, mis om märgitud fluorokroomiga ja mille nukleotiidi ahelasse lülitamise järel DNA pol antud