muutustest) TMA(transcription mediated aplification) ehk transkriptsioon vahendatud amplifikatsioon on süsteem, mis kasutab kahte erinevat ensüümi. Esimene ensüüm on pöördtranskriptaas, mis teeb teeb 2-ahelalise DNA koopia RNA või DNA matriitsist. Teine ensüüm RNA polümeraas, sünteesib tuhandeid koopiaid komplementaarsest RNA järjestusest (RNA amplikon), kasutades 2-ahelalist DNA-d matriitsina Iga RNA amplikon on uueks märklauaks pöördtranskriptaasile, mistõttu protsess automaatselt kordub uuesti, mille tulemusena algne järjestus amplifitseerub eksponentsiaalselt. TMA toodab 1001000 koopiat tsükli kohta, mis tõttu 15 -30 minutiga toodab protsess 109 koopiat Chlamydia trachomatis test APTIMA CT (16S rRNA) (Gen-Probe) Mycobacterium tuberculosis Amplified MTD Direct test (rRNA) (Gen-Probe) 23
teostamisel lisatakse geelile molekulmassi marker, mis on kommertsiaalsed DNA fragmentide segud, mille iga lõigu pikkus on teada. Võrreldes amplikoni paiknemist molekulmassi markeri bändide suhtes on võimalik ligikaudselt hinnata amplikoni suurust. Joonis 2. PCR põhimõtteline skeem. (A) Esimeses tsüklis kasutatakse uuritavas materjalis olevat 2- ahelalist DNA-d sihtmärgina. (B) Toimub 2- ahelalise DNA denaturatsioon, mille tulemusena tekib kaks 1-ahelalist DNA-d. Nende külge seonduvad sünteetilised oligonukleotiidsed parimerid (mustad blokid) 5’>3’suunas. Seejuures
(elektrostaatiline interaktsioon). - türosiin aitab lämmastikalust õiges kohas hoida. Tyr sulgeb ensüümi aktiivtsentri. Pi on uue nukleotiidi α-Pi, see reageerib eelmise nukleotiidi oksoaniooniga: R-O- + Pi-R. Lahkuv rühm on PPi, see ei lahku kohe, vaid siis, kui toimub ensüümi translokatsioon st aktiivstsenter moodustab järgmise nukleotiidi 3’OH ümber, et uus nukleotiid saaks liituda. Liikumine DNA valmival ahelal. Oluline! Translokatsiooni energiat uuritakse alles. - On 1-4 ahelalist DNA-d, peamine on kaheahelaline DNA. DNA-d saab mitmel viisil replitseerida. PCR – polümeraasi ahelreaktsioon. Seda saad replitseerida, et üks uus ahel + üks vana ahel – poolkonservatiivne. Üks uus ahel + üks uus ahel või vana + vana – konservatiivne. Uue ja vana ahela mosaiik – dispersne. Vigade parandused: 72 - kompab ja kontrollib DNA sümmeetriat. Kui tekib vale paardumine, siis DNA väikeses vaos toimub geomeetria muutus
annaabi.ee 
