lisata? Ei tohiks nagu midagi juhtuda. Kui me puhvrit üldse ei lisa, siis ei näe pärast oma DNA bände ja seda on algselt raksem hambasse pipeteerida. DNA võib hambast välja voolata. Mis juhtub migreeruva DNA-ga, kui elektroforees „ununeb“ jooksma mitmeks tunniks? Kus on DNA? Mida kauem hoidad, seda kaugemale DNA liigub. Lõpuks meil ei ole geelis enam DNAd näha, sest DNA läheb puhvrisse. Praktiline töö nr.4: DNA puhastamine agaroosgeelist Eesmärk: Huvipakkuva PCR produkti väljapuhastamine geelist. Materjalid: Võimalikult täpselt Agaroosgeeli tükk DNA Meile huvipakkuv DNA välja lõigatud fragmendiga fragment (0,15g) 450 µl ADB puhver Kõrge soolakonsentratrsioon ja sobilik pH, et DNA seonduks SiO2’le. 7
kandjale, nailonist või nitrotselluloosist membraanfiltrile. Nukleiinhapete ülekandel eelistatakse nailonfiltrit, kuna see on mehaaniliselt tugevam kui nitrotselluloosfilter. Nitrotselluloosi eelistatakse valkude ülekandel. NH-d fikseeritakse nailonfiltrile ristsidumisel UV valgusega või immobiliseerimisel vaakumahjus (0,5 - 2 tundi; 80°C). Nitrotselluloosile saab siduda NH-d ainult vaakumahjus. NH-te seostumine membraanfiltrile on kovalentne, kuid mittespetsiifiline. Kuna DNA ülekannet agaroosgeelist nitrotselluloosfiltrile kirjeldas esmakordselt Edwin M. Southern (1975), siis nimetatakse meetodit tema auks Southern blot-iks. Northern blot-meetod tähistab RNA ülekannet geelist filtrile ja Western blot elektroforeetiliselt lahu-tatud valkude ülekannet filtrile. Nukleiinhapped hübridiseeruvad väga efektiivselt ligikaudu 25°C allpool sulamistem-peratuuri (Tm). Sulamistemperatuuri (Tm) juures on nad 50% denatureeritud olekus (üheahe-lalised). Tavaliselt
nailonist või nitrotselluloosist membraanfiltrile. Nukleiinhapete ülekandel eelistatakse nailonfiltrit, kuna see on mehaaniliselt tugevam kui nitrotselluloosfilter. Nitrotselluloosi eelistatakse valkude ülekandel. NH-d fikseeritakse nailonfiltrile ristsidumisel UV valgusega või immobiliseerimisel vaakumahjus (0,5 - 2 tundi; 80°C). Nitrotselluloosile saab siduda NH-d ainult vaakumahjus. NH-te seostumine membraanfiltrile on kovalentne, kuid mittespetsiifiline. Kuna DNA ülekannet agaroosgeelist nitrotselluloosfiltrile kirjeldas esmakordselt Edwin M. Southern (1975), siis nimetatakse meetodit tema auks Southern blot-iks. Northern blot-meetod tähistab RNA ülekannet geelist filtrile ja Western blot elektroforeetiliselt lahu-tatud valkude ülekannet filtrile. Nukleiinhapped hübridiseeruvad väga efektiivselt ligikaudu 25°C allpool sulamistem-peratuuri (Tm). Sulamistemperatuuri (Tm) juures on nad 50% denatureeritud olekus (üheahe-lalised). Tavaliselt
annaabi.ee 
