olnud filter, siis puhvis olnud membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. Pärast ülekannet, tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani 3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusele üheks tunniks. Edasi toimub primaarse antikeha sidumine ja inkubeerimine 4 kraadi juures üleöö. Peseme membraani 4x5min TBS/Tween. Sekundaarse antikeha sidumine, inkubeerimine ja pesemine 2x TBS/Tween ja 1x TBS. 3. Membraani visualiseerimine. Tõstame membraani kiledele ja kanname peale substraat (SuperSignal West (Pierce) mõlemad 0,5ml) ja ootame 5 min. Visualiseerime membraani. 1 2 M Ka siin on näha, et uuritavat valku on palju. Kõrval olevale kontrollrajale on arvatavasti mingi saastus tekkinud. Direct ELISA.
membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. · Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. · Pärast ülekannet, tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani 3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusele üheks tunniks. · Edasi toimub primaarse antikeha sidumine ja inkubeerimine 4 kraadi juures üleöö. · Peseme membraani 4x5min TBS/Tween. · Sekundaarse antikeha sidumine, inkubeerimine ja pesemine 2x TBS/Tween ja 1x TBS. 3. Membraani visualiseerimine. · Tõstame membraani kiledele ja kanname peale substraat (SuperSignal West (Pierce) mõlemad 0,5ml) ja ootame 5 min. · Visualiseerime membraani. Tulemus näitab meile, et kogu meie valk on kondenseerunud ühe piirkonna ja katse oli sooritatud korrektselt. Direct ELISA.
annaabi.ee 
