Vajad kellegagi rääkida?
Küsi julgelt abi LasteAbi
Ukraina abi Ukraina kaitse vajab abi. Tee annetus täna! Aita Ukrainat Sulge
Add link

"wellides" - 1 õppematerjal

50
docx

Molekulaar- ja rakubioloogia

Rakkude külvamine 24-augulisele plaadile  Valmistasin söötmega sobiv lahjendus, et rakkude lõpptihedus 24-augulisel plaadil oleks 30%. Minu rakkude algne tihedus on 90%, seega: • tiheduse suhe: 90%30% = 3x • pindalate suhe (6cm plaat vs 24 auguline plaat): 21cm21,9cm2 = 11,05x • lahjendus: 3 ∙ 11,05 = 33,15x • 1200 μl 33,15 x = 36,20 μl rakke 1 welli kohta võtame 500 μl, seega kohta welli kohta (+10%) 2 ∙ 500μl ∙ 110%=1100 μl rakususpensiooni. • 1100 μl – 2,2 ∙ 33,15 μl = 1100 μl – 72,93 μl (rakud) = 1027,10 μl (sööde)  Pipeteerisin rakususpensioon klaasidel olevatele transfektsioonisegudele, loksutasin. Panin rakud CO2 inkubaatorisse 37°C, 5% CO2. Teine päev – mikroskoopia Mõlemates wellides suspensioon oli punase värvi, seega pH on rakkudele paras, seega saastus ei olnud, vaatamata sellele, et antibiootikum pole olnud lisatud. Saab järjledada, et aseptika oli jälgitud. Selleks, et teha kindlaks, et meie plasmiid on raku sees on vaja kasutada Fluorestsentsmikroskoobi. Fluorestsents - aine omadus emiteerida valgust pärast ergastamist kindla lainepikkusega kiirgisega.Kui vaatlesime mikroskoobi all mõlemaid proovi, siis nägime rakke kujuga, mis on iseloomustav NIH3T3 rakkudele. Lülitades flourisensi sisse nägime, et rakud annavad rohelise signaali EFGP (rohelised täppid). Kui võrrelda tihedused, siis on kindlasti näha, et rohelist signaali rakke on 2x vähem, seega tranfekteerimise effektiivsus on umbes 50%. Aga kuna signaal on, saab järjeldada, et plasmiidid on raku sees ja tranfekteerimine õnnestus. Rakkude immuunotsütokeemiline värvimine Ergastamiseks vajaliku kiirguse lainepikkus on alati lühem, kui emi...

Molekulaar- ja rakubioloogia... - Tallinna Tehnikaülikool
68 allalaadimist


Registreeri ja saadame uutele kasutajatele
faili e-mailile TASUTA

Konto olemas? Logi sisse

Sellel veebilehel kasutatakse küpsiseid. Kasutamist jätkates nõustute küpsiste ja veebilehe üldtingimustega Nõustun