GLÜKOOSISISALDUSE MÄÄRAMINE ENSÜMAATILISEL MEETODIL
Viimase
kogus on võrdelises sõltuvuses oksüdeeritud glükoosi kogusega, sest GOx
reaktsioonil saame ekvimolaarses koguses oksüdeeritud glükoosi ja
vesinikperoksiidi. Mida intensiivsem on lahuses punase veresoola kollane värvus,
seda kõrgem on tema optiline tihedus ja seetõttu ka glükoosi sisaldus.
Antud töös on substraadina kasutusel kaaliumheksatsüanoferraat(II) K 4[Fe(CN)6]
ehk ajaloolise nimetusega kollane veresol. Tekkiv punane veresool K 3[Fe(CN)6]
annab lahusele kollase värvuse ja on detekteeritav lainepikkusel 410 nm.
Reaktsioon kulgeb happelises keskkonnas pH 6 juures.
Töö käik
Tööreaktiiv
Juba valmisolev tööreaktiiv sisaldab ensüüme GOx ja POx, kromogeenset
substraati K4[Fe(CN)6] ja fosfaatpuhvrit pH väärtusega 6,0.
25 ml tööreaktiivi valmistamiseks võetakse vastav mõõtekolb, millesse viiakse:
2,5 mg glükoosi oksüdaasi GOx
1,5 mg peroksüdaasi POx
16,6 ml 0,2 M puhverlahust