Molekulaarbioloogia aruanne
suure läbimõõduga, sest ikka olid väiksed vead pipeteerimisel.
17.
18. Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCRi) teostamine
19. PCRi kasutatakse valitud DNA lõigu paljunadamiseks. Väga tähtis moment reaktsiooni
teostamisel on õigete praimerite valimine ning reaktsioonitingimuste kindel täitmine. PCR
reaktsioon toimub kolme-etapiliselt: DNA ahelate denatureerimine, praimerite seondumine DNA
ahelatega ning DNA süntees.
20. Oma töös kasutasin Reverse (vastassuunilise) praimerina SV-40 poly A, Forward
(pärisuunalise) praimerina EGFP-3-170, ning plasmiidina pEGFP-FoxO3a-wt. Oodatav
produkti pikkus – 2400 aluspaari.
21. Töö käik:
1. Pipeteerisin kokku PCRi reaktsioonisegu (20μl):
11,3 μl vett
2 μl 10x polümeraasi puhvrit – tagab vajalikud reaktsioonitingimused, nagu pH,
soolade kontsentratsioon jt
μl 25 mM MgCl2 (lõppkonts. 2,5 mM) – Mg2+ ioonid on vajalikud polümeraasi
annaabi.ee 
