"vaakumpunbaga" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

tehnikat, töötada puhta laminari all!  Pipeteerisin 15 ml tuubi 5 ml söödet ja 6 cm tassile 4 ml söödet.  Võtsin külmast krüoviaaliga NIH3T4 rakud ja sulatasin käes kiirelt (DMSO!)  Lisasin viaali 0,5 ml sooja söödet ja tõstsin rakud 15 ml tuubi ringi.  Fuugisin rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (tegemis on õrna rakkudega, seega fuugimine peab olema madala kiirusega)  Tõmmasin sööde vaakumpunbaga nii, et rakud jäid põhja  Tassilt tuubile rakkudega lisasin 0,5 ml söödet, suspendeerisin ning panin tagasi tuubist tassile, ühtustasin rake ja panin tass CO2 inkubaatorisse, kus tingimused – temperatuur, rõhk ja CO2 % onn sarnased tingimustega organiismi sees, eh 37 °C ja CO2 5% - stabiliseerib pH. 2. Praktikum – rakkude paljundamine Selleks, et arvutada lahjendused ja veenduda et rakud ei ole surnud, on vaja hinnata