Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum
agaroosgeelist. Kaalume enda väljalõigatud osa ja lisame sellele ADB
puhvrit. Inkubeerime 55 kraadi juures kuni kogu geel on sulanud ja lahus
on homogeenne. Seejärel pipeteerime kõik segu ränikolonni, DNA jääb
räni külge. Tsentrifuugime. Valame kogumistopsist puhvri ära ja peseme 2
korda pesupuhvriga. Seejärel lisame elueerimispuhvrit ja tsentrufuugime
uuesti. Nüüd saime tulemusekt inserdi ja aktseptorplasmiidi.
3. Järgneb ligatsioon. Võtame vektorit ja inserti suhtes 1:3 ja lisame segule T4
DNA ligaasi ja ligeerimispuhvrit ja MQ’d. Ligeerime 4 kraadi juures üleöö.
Kõrvale teeme ka kontroll-proovi mis sisaldab ainult vektor+ligaasi +
puhver, ilma inserdita.
4. Järgmiseks sisestame plasmiidi bakterisse selle paljundamise eesmärgil.
Selleks lisan reaktsioonisegule E.coli kompetentseid rakke, inkubeerin 15-
annaabi.ee 
