Molekulaar- ja rakubioloogia
1 l puhastatud PCR produkti
1 l plasmiidi (9ng/ l)
0,5 l 10x ligeerimispuhvrit
0,5 l e. 5 ühikut T4 DNA ligaasi (5 U/l)(hoida jääl või külmakehas)
2 l Milli-Q vett
2. Homogeniseerida lahus pipeteerimise või vortexi teel (kasutasin pipeteerimist).
3. Vajadusel tsentriguugida segu põhja (kuna kogu ligeerimissegu pipeteerisin
põhja ühte tilka kokku ning vortexit ei kasutanud, polnud vajadust
tsentrifuugimiseks).
4. Ligeerida +4oC juures üleöö.
4. Transformeerimine
a) Kompetentseteks nimetatakse rakke, mis on võimelised sisse võtma DNA-d.
Kompetentsus võib olla kas loomulik või kunstlik, saavutatud laboritingimustes.
Kompetentsus on vajalik selleks, et transformeerimisel soovitav plasmiid rakkudesse
viia. Kompetentsete rakkude saamiseks laboritingimustes töödeldakse rakke kas KCl,
CaCl või RbCl-ga, mis muudab rakumembraani DNAd läbilaskvaks.
annaabi.ee 
