"transfornatsioonisegu" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

temperatuuri suhtes. 3. Transformeermiseks võta 20 l kompetentseid rakke ning lisa ligatsioonisegule. 4. Inkubeeri 30 min jääl. ­ vajalik efektiivsuse suurendamiseks keemiliselt kompetentseks muudetud rakkude puhul, kuna külmades tingimustes kinnitub DNA rakuseinale. Etapi võib jätta vahele, või lühendada, kuid see vähendab transformatsiooni efektiivsust. 5. Selle aja jooksul vala LB+Amp+X-gal+IPTG tassid 6. Heat shock: inkubeeri transfornatsioonisegu 90 sekundit 42 oC juures. ­ järsk temperatuuritõus tekitab plasmamembraani poorid ning võimaldab DNA-l rakkudesse siseneda. 7. Tõsta tuub vähemalt 2 minutiks jääle ­ võimaldab rakkudel pärast Heat-shocki rakumembraani taastada. 8. Lisa 500 l LB vedelsöödet (sega korralikult) 9. Inkubeeri 15 min 37oC termostaadis ­ vajalik selleks, et rakkudel oleks aega pärast transformatsiooni kosuda ja hakata kiiremini paljunema. Etapid 8-11 võib ka vahele