Molekulaar- ja rakubioloogia
plasmiidiga transformeerimisel tekib 1000 kolooniat).
c) Transformeerimise protokoll:
1. Inaktiveeri ligaas inkubeerides eppendorfi 10 min 65 °C vajalik, et lõpetada
vektori ja inserdi ligeerimine ja hoida ära soovimatud ligeerimisprotsessid segus.
2. Transformeerimiseks võta -80°C juurest 10 minutiks jääle sulama kompetentsed
rakud. jääs hoidmine on vajalik, kuna külmutatud rakud on väga tundlikud kõrge
temperatuuri suhtes.
3. Transformeermiseks võta 20 l kompetentseid rakke ning lisa ligatsioonisegule.
4. Inkubeeri 30 min jääl. vajalik efektiivsuse suurendamiseks keemiliselt
kompetentseks muudetud rakkude puhul, kuna külmades tingimustes kinnitub DNA
rakuseinale. Etapi võib jätta vahele, või lühendada, kuid see vähendab
transformatsiooni efektiivsust.
5. Selle aja jooksul vala LB+Amp+X-gal+IPTG tassid
6. Heat shock: inkubeeri transfornatsioonisegu 90 sekundit 42 oC juures. järsk
annaabi.ee 
