"transformatsiooniefektiivsuse" - 1 õppematerjal

Mikroobifusioloogia

Tänapäeval on bakterite transformatsioon tavaline laborimetoodika, konstrueerimaks uusi DNA-vektoreid või bakteritüvesid. Kuigi bakterite transformatsioon on lihtne ja levinud metoodika, määrab transformatsioon paljuski ära, milliseid baktereid tänapäeval uuritakse. Bakterid, mida ei saa kunstlikult kompetentseks muuta, on üldiselt jäetud uurimise alt välja. Transformatsiooni efektiivsuseks nimetatakse transformantide arvu 1 g DNA kohta. E. coli puhul kasutatakse transformatsiooniefektiivsuse arvutamiseks pBR322 DNA-d. Transformatsiooni võivad takistada retsipientraku restriktaasid, mis tunnevad erinevalt metüleeritud DNA-d ära ning lõikavad transformeeritud DNA tükkideks. Selle vältimiseks kasutatakse metülatsioonidefektseid või restriktaaside defektseid tüvesid. Kunstlik kompetentsuse tekkimine on üsna segane ning sõltub bakteri liigist, puhvrist ning bakterite kasvatamisest. Sellest johtuvalt pole leitud