Molekulaar- ja rakubioloogia
10. Teha söötmega sobiv lahjendus, et rakkude lõpptihedus 24-augulisel plaadil oleks 33,3%.
Arvestada 0,5 ml rakususpensiooni augu kohta. Selleks võtta 40 µl rakususpensiooni ja 410 µl
söödet augu kohta.
11. Pipeteeri rakususpensioon klaasidel olevatele transfektsioonisegudele, loksuta.
12. Aseta rakud inkubaatorisse: 37°C, 5% CO2
13. 2-4h möödudes pesta rakke 1xPBS-ga ja lisada rakkudele värske sööde (nüüd võib
sisaldada ka antibiootikume).
Tavaliselt rakkude transfekteerimisel nad külvatakse, lastakse paraja tiheduseni (30-70%)
kasvada ja transfektsioonisegud lisatakse kinnitunud rakkudele. Meie kasutame vastupidist
tehnikat aja kokkuhoiu huvides.
c. Rakud elasid tranfektsiooni üle edukalt mikroskoobi all oli näha, et rakkude
tihedus oli kasvanud uuesti 100%-ni.
d. Transfektsiooni efektiivsus oli umbes 30%.
13. a. Rakkude fikseerimise ja antikehadega märgistamise protokoll:
Vajalike lahuste valmistamine:
1