Mikroobifusioloogia
1. rakkude ettevalmistamine. Selles etapis on oluline rakkude
kasvukiirus (millisest kasvufaasist kompetente tehakse), temperatuur ja
puhvri koostis.
2. mikropooride tekitamine ning DNA sisenemine rakku. Levinuim
meetod on temperatuurisokiga või elektriga rakkude mõjutamine
3. bakterite toibumine sokist. Selles etapis on kõik metoodikad
sarnased, rakke kasvatatakse rikkal söötmel bakteri kasvu
temperatuurioptimumil.
Klassikaline ja ka kõige levinum meetodika kunstlike kompetentside
saamiseks on rakkude mõjutamine kahevalentsete metalliioonidega. Selliste
kompetentide trasformatsiooni nimetatakse keemiliseks transformatsiooniks,
mis kirjeldati 1970. aastal. Transformatsiooniefektiivsus 10 5 109 CFU/1 g DNA
kohta. Kuigi keemiline transformatsioon on ammu teada ja väga levinud, siis
täpset mehhanismi, kuidas DNA rakkudesse transporditakse, pole teada.
annaabi.ee 
