"temperatuuriimpulsiga" - 1 õppematerjal

Mikroobifusioloogia

Cs+, Na+, Li+, K+ ja Rb+ Puhvris tuleb leida konkreetse liigi jaoks optimaalne metalliioonide kontsentratsioon, sest nii madalamal kui ka kõrgemal kontsentratsioonil optimaalsest vähendavad metallioonid transformatsiooniefektiivsust. E. coli transformatsiooni puhul peetakse optimaalseks 10 mM Ca 2+ ja 40 mM Mn2+. Nõrgalt happeline puhver soodustab transformatsiooni. Soodustab ka DMSO lisamine puhvrisse. Keemilise transformatsiooni puhul järgneb rakkude töötlemine kõrge temperatuuriimpulsiga, mille ajal arvatavasti tekivad rakukesta mikropoorid ning DNA transporditakse aktiivselt rakku. E. coli transformatsiooni ajal hoitakse rakke 37 ­ 42 kraadi juures 0,5 ­ 3 minutit. Optimaalseks peetakse 42 kraadi ja 0,5 minutit. Temperatuurisokile järgneb rakkude hoidmine 2-5 minutit jääl ning kasvatamine rikkal söötmel kasvuks temperatuurioptimumi juures. Grampositiivsete bakterite korral vähendatakse rakukesta