Molekulaar- ja rakubioloogia
Tulemuseks oli küllaltki sujuv värvirida.
Blotipaberile oma nime ja mustrit pipeteerides jälgisin, et pipett ei läheks liiga sügavale
lahusesse, et pipett oleks otse ning pipeteerimine toimuks sujuvalt, et kogused oleks
võimalikult täpsed ning täpid tuleksid ühtlased.
1. Polümeraasi ahelreaktsiooni teostamine
a) Paljundamiseks sain plasmiidi pEGFP-FoxO3a-wt, praimeritest kasutasin:
· EGFP-3-s-170-F (5'-CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG-3')
· SV40p-R (5'-GAAATTTGTGATGCTATTGC-3')
Praimerid on valitud selliselt, et nad ei moodustaks omavahel dimeere (ehk ei oleks omavahel
komplementaarsed) ning oleksid komplementaarsed lõiguga paljundataval DNA-l, millega
praimerid seonduvad ning kust algab replikatsioon.
b) Kasutatud PCR-i programm:
1. 95 o C 15 minutit ensüümi (polümeraasi) aktiveerimiseks
2. 95 o C 10 sekundit denatureerimine ehk ahelate lahku kuumutamine
3. 56 o C 20 sekundit praimerite hübridiseerumine DNAle (annealing)
annaabi.ee 
