"sulatame" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum

Ampitsilliin: Tahame saada 100 µg/ml ja meil on 200ml ehk siis 100*200 = 20000 µg mis on 20 mg. Meil on lahus 100mg/ml ehk siis peame võtma 1000 µl / 5 ehk 200 µl. Töö käik:  Meil oli eelnevalt juba ligaas inaktiveeritud ja reaktsioonisegu oli jääl  Võtame -80kraadi juurest E.coli rakud sulama.  Transformeerimiseks võtame 100 µl kompetentseid rakke ja lisame reaktsioonisegule.  Inkubeerime 15 minutit jääl.  Sulatame 200ml LB söödet, jahutame umbes 50 kraadi juurde (muidu ampitsilliin laguneb kuumuse käes ära) ja lisame sinna X-gal, IPTG ja ampitsilliini. Loksutame segamini ja valame söötme õhukeste kihtidena Petri tassidele.  Teeme transformatsioonisegule kuumašokki 50sekundit 42 kraadi juures. Meetod seisneb selles, et CaCl2 tõttu DNA tõmbus rakumembraanide ligi. Ja nüüd kui paneme oma segu sooja, siis membraanikahjustuse tagajärjel