"substraadilahus" - 1 õppematerjal

Molekulaarne ja rakenduslik immunoloogia

valgu seondumine plastikpinna külge. Edasi välditakse mittespetsiifiline seostumine, nt valgu kaseiini abil.  Kantakse peale analüüsitav seerumlahjendus (primaarne antikeha) ja inkubeeritakse.  Inkubatsioon ensüümiga (AP- alkaalne fosfataas või HRP- peroksüdaas), mis on konjugeerunud sekundaarse antikehaga.  Märgise hulga mõõtmine- ensüümaktiivsus määratakse kromogeense substraadi abil. Substraadilahus muutub ensüümaktiivsuse toimel värviliseks, spetsiaalse kolorimeetri (ELISA plaadi lugeja) abil mõõdetakse igas augus värvuse intensiivsus (optiline tihedus). ELISA sobib suurte analüüside hulga skriinimiseks, tema analüütiline tundlikkus on väiksem kui radioimmuunmeetodil, kasutatavad reaktiivid on aga stabiilsemad. Kasutatakse ära ensüümi katalüüsivaid omadusi, neutraalse substraadi ensümaatilisel töötlemisel tekib värviline produkt, mida saab detekteerida