Valgu kontsentratsiooni määramine Bradfordi meetodil
2) Bradfordi reagendi inkubeeritud valguga spekter.
Värvi valgukompleksi absorptsiooni mõõdetakse 595 nm juures. Seejärel koostatakse
kaliibrimiskõver valgustandardi lahjendusrea absorptsiooni tulemuste põhjal. Saadud
kaliibrimiskõvera kaudu saab määrata uuritava valgu kontsentratsiooni.
Standardvalk.
Standardvalguks sobib mingi odav valk, millest on võimalik võtta täpne kaalutis ning teha
kindla kontsentratsiooniga lahus. Siiski standardvalgu valik mõjutab oluliselt katse tulemust.
Originaaltöös kasutati valgustandardiks BSA-d (bovine serum albumine), mis on jäänud
laialdaselt kasutusse. Siiski on täheldatud, et BSA annab tugevama värvimuutuse, kui enamik
valke, mistõttu võivad BSA abil määratud valgu kontsentratsioonid olla kõrgemad tegelikust.
Tihti kasutatakse valgu standardiks ka immunoglobulin G-d (IgG).
Mõõtepiirkond:
Bradfordi meetodil on võimalik määrata valgu kontsentratsiooni vahemikus 100-1,500