Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum
2,0µl 25mM MgCl2 on polümeraasi ko-faktoriks, seega
(lõppkontsentratsioon 2,5mM) mõjutab reaktsiooni spetsiifilisust
2,4µl 2mM dNTP et segus oleks vabu nukleotiide
(lõppkontsentratsioon 240µM)
1,0µl Pärisuunalist praimerit Polümeraasi seondumiseks 5´
(lõppkontsentratsioon 0,5µM) poolele
1,0µl Vastassuunalist praimerit Polümeraasi seondumisesk 3´
(lõppkontsentratsioon 0,5µM) poolele
0,2µl template-DNA sisaldab regiooni, mida tahetakse
(lõppkontsentratsioon praimerite abil amplifitseerida
0,25ng/µl)
0,1µl HotFIRE Pol Polümeraas (0,5U) Termostabiilne polümeraas,
sünteesib 5´-3´sidemeid.
Arvutused: Kokku soovime saada 20µl
3