"sekventsis" - 1 õppematerjal

Molekulaarbioloogia aruanne

Võib olla põhjus selles, et ampitsiliin polnud nii effektiivne ja selektiivne. Need bakterid võiksid sattuda meie tassidele õhust, kuna selles praksiruumis tehakse töid paljude teiste preparaatidega. 63. 64.Sekveneerimise tulemuste analüüs 65. Tavaliselt kontrollitakse saadud plasmiidi kasutades Sangeri meetodit. See meetod põhineb PCR reaktsioonil kuhu on lisaks tavaliste nukleotiidalustele lisatud ka selliseid aluseid, mis om märgitud fluorokroomiga ja mille nukleotiidi ahelasse lülitamise järel DNA pol antud ahela pikendamise lõpetab. Kuna iga terminaalne ddNTP on märgitud erineva fluorokroomiga saab DNA järjestuse teada lahutades saadud reaktsiooni kapillaarelektroforeesil ja lugedes saadud kromatogrammilt flourestsents märgiste järgi meid huvitava DNA järjestuse. 66. Mina valisin analüüsiks 7-hRin-T7-G01, kuna minu järjestust ei olnud nimekirjas. 67. Antud sekventsis on ainult kaks kohta, kuhu tekkisid punkmutatsioonid. Tegemist on transversiooniga, kuna puriin asendatakse purimidiiniga (G ja T asendus). Mutatsioonid võivad tekkida DNA molekuli sünteesi käigus. 68. Meie insert läks pST-Blue vektori õieti sisse ( mitte vastupidi, kuid see variant ka võis olla) 69. AATCTGAATTCGTAAGCTCGGTACCACGCATGCTGCAGACGCGTTACGTATCGGATCCAGAATTCGTG ATTCTCGAGTCATGTCATATTTTCTCTCTTCTTCTTCAAAGAACCTTTGAGCTTCTTCCACAGGC TGTCTTTTCTCTTCAGTTTCTTTTCCATCAAGGATGGCATGGACTCCTTCTTGCGAATTTCCCT CACTAAGCCATGAAAAGCATCATCAATACAGAATCTGAGGGCTGCAGAGGTCTCAAAAAAACC ACAATTATATTCTTGGGCAAGACTCAAGCCTTCTTCTGTAGAAACCTGGCGGAACTGTTCCAG ATCAATTTTGTTACCCACCAGCACCAGGGGAATTTCATAGGTGTGGCGGACCTGAAAAATGAG CTCTTTAAACTTGGCAGCCTCCTGAAATGATTGACGGTCAGTGACGGAGTAGCAGATGATGAA GCCTTCCCCACCTCGCATGTACTGCTCCCGCATGGCTGTGAATTCTGCCTGGCCATCAGTGTC CAAGATGTCCAAGTAAGCTGGCTCATTGTCAATCCTGACCTGGGTCTTATAAGCATCTTCTATA  GTAGGGTCATGATAATCAGGGAACTGATGACTAATAAACTGCATTGTCATTGCGC...