Rekombinantsed peptiidid ja kloonimine
23. Millised on sarnasused ja erinevused Sanger ja Maxam-Gilbert meetodite vahel?
Kirjelda DNA sekveneerimist Sangeri meetodi abil. Miks vahel kasutatakse dGTP
analooge: dITP ja t-deaza-dGTP?
Mõlema meetodi puhul kasutatakse isotoobi visualiseerimiseks ja elektroforeesi, kus toimub
lahutamine. Ning samuti mõlemate meetodi puhul tekivad erineva suurusega DNA juppid (kas
lõhustamise või sünteesi tulemusena).
Dideoxy Chain Termination method ehk Sangeri sekveneerimismeetod (Joonis 5). Selles meetodis
kasutatakse tavaliselt 4 reaktsiooni. Selleks võetakse üht DNA ahelat, lisatakse praimeri ja
radioaktiivselt märgistatud isotoopi, selleks et hiljem visualiseerida produkti. Igasse reaktsioonisse
lisatakse polümeraasi 4 dNTP ja ühe dNTP tuletisena ddNTP, mis piirab ehk inhibeerib
transkriptsiooni. ddNTP-l puudub 3' otsa hüdroksüülrühm (esineb H) ning pärast seda, kui neid
lülitakse ahela sisse süntees lõpeb
annaabi.ee 
