"rikkume" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

Kui inserd ligeeris vektoriga kokku, siis see vektor enam ei kodeeri ensüümi, mis lõhub β- galaktosidaasi, kuna inserdi sisestamisel me rikkume selle geeni lugemisraamid. Selle alusel  põhineb meie sini-valge selektsioon: bakterid lõhuvad galaktosidaasi – ei sisalda inserdi, ei lõhu – sidaldavad. Selle protsessi saab ka visualiseerida. Ligeerimiseks segasime kokku:  1,5 µl MQ vett  1 µl puhastatud PCR produkti – L-Desmo  1 µl plasmiidi, ehk pSTBlue-1 vektorit  1 µl T4 DNA ligaasi, mis on