Geenitehnoloogia (GMO)
Kõigi kolme erinevat tüüpi otstega DNA
molekulide ühendamiseks kasutatakse
ligeerimist s.o. DNA fragmentide ühendamist
ligaasi abil. Ligaas katalüüsib kovalentse
sideme moodustumist 5'-fosfaat- ja 3'-
hüdroksüülrühma vahel. Enamasti kasutatakse
T4 DNA ligaasi.
Optimaalsete tingimuste korral on inserdi
kloonimisse efektiivsus keskmiselt 1:50 st.
ühel juhul siseneb insert vektorisse ja 49-l
juhul toimub lihtne vektori retsirkulariseerumine.
Vektori retsirkularisatsiooni vältimiseks /
vähendamiseks ja kloonimise efektiivsuse
tõstmiseks on mitmeid võimalusi.
1. Kasutada vektori lineariseerimiseks
restriktaase, mis annavad erinevaid
üheahelalisi otsi. Taoliselt on võimalik
defineerida ka inserdi sisestamise suunda.
2. Vektorit töödeldakse aluselise fosfataasiga,
Näit. CIP (calf intestin phosphatase). Selle
tulemusel eemaldatakse vektori 5'fosfaat
rühmad ja vektor ei religeeru iseendaga kokku.
3. Tömpide otstega DNA lõikude paremaks
annaabi.ee 
