Meditsiinilise mikrobioloogia praktikum
(4) hinnata erinevate mikroorganismide tüvede omavahelist seotust.
NUKLEIINHAPETE ENSÜMAATILINE RESTRIKTSIOON pole nii täpne meetod kui sekveneerimine.
Samas on restriktsioonanalüüs oluliselt odavam ja kiiremini teostatav.
DNA ensümaatiliseks lõikamiseks kasutatakse endonukleaase e. restriktsiooniensüüme.
Iga ensüüm tunneb ära kindla nukleotiidse järjestuse, mille pikkus on tavaliselt 4 kuni 8
67
nukleotiidi. See on restriktsioonikoht, kus toimub DNA ahela lõikamine. Tekkivate lõikude
pikkus ja arv sõltub eeskätt lõigatava DNA pikkusest ja ensüümi tüübist. Näiteks
ribotüpeerimise korral teostatakse bakteri kromosomaalse DNA restriktsioon, millele järgneb
elektroforees ja Southern’ hübridisatsioon. Hübridisatsiooniks kasutatakse sonde, mis seostuvad
ribosoome kodeerivate geenidega.
Restriktsioonile järgneb elektroforees agaroosgeelis, mis võimaldab tekkinud DNA fragmentide