"restriktsioonikohad" - 1 õppematerjal

Rekombinantsed peptiidid ja kloonimine

moodustaksid erinevad otsad. Need erinevad otsad takistavad ligeerimise tagasipöördumist ja aitavad sisestada fragmendi õigel suunal. Samas peab vektori ja sisendi läbitöötlema sama restriktaasidega, vastavalt suunale, kuidas tahetakse kloonida. Kui ei ole võimalik kasutada kahte piirkonda, siis kasutatakse defosforüleerimist. 13. Kuidas on võimalik ligeerida vektorisse DNA fragment, kui vektoril puuduvad restriktsiooni kohad (,,site")? Võib sünteetiliselt luua need restriktsioonikohad. Või esineb ka meetod, mille kirjeldas Tsenq H 1999aastal. Meetod põhineb ,,sticky" otste moodustumisel kasutades praimeri disaini ja lambda eksonukleaasi PCR reaktsioonis. Moodustuvad otsad on natuke pikem, kui peavad olema ning tekkinud tühiku nende vahel täidetakse Klenow fragmendi abil. Samas kasutatakse topoisomeraaside toime; ka spetsiifilised praimerid. 14. Kirjelda filament bakteriofaagi M13 replikeerumist. Miks kasutatakse F-faktoriga peremees-rakke?