"restriktaari" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum

0,1 µl EcoRI restriktaas Lõikab DNA’d EcoRI saitidest. (lõppkontsentratsioon 0,1U/ µl) Agaroosgeel 2 µl 6x DNA värv Arvutused: Puhver: 10 x 1/10 = 1µl Restriktaas: 10U/ µl Tahame saada 0,1U/ µl ja meil on 10 µl. 0,1x10 = 1U 1/10 = x/1 ehk x=0,1 Vesi- 10-5-1-0,1 = 3,9 µl DNA värv: 10 / 5 = 2. Töö käik:  Pipeteerime kokku DNA, MQ, restriktaari ja puhvri. Inkubeerime 37 kraadi juures 30 minutit.  Valame agaroosgeeli (meie töö puhul oli see enne juba valmis)  Peale 30 minutit tsentrifuugin oma kontroll- restriktsiooni, et koguda kokku kaanelt ja seintelst veeaur.  Lisame 2 µl 6X DNA värvi ja pipeteerime kogu segu agaroosgeeli hambasse.  Voolutame 150V juures 10-15 minutit. Teeme geelist pildi. 13 Minu rada: 5