"reaktsioonisse" - 1 õppematerjal

Rekombinantsed peptiidid ja kloonimine

lahutamine. Ning samuti mõlemate meetodi puhul tekivad erineva suurusega DNA juppid (kas lõhustamise või sünteesi tulemusena). Dideoxy Chain Termination method ehk Sangeri sekveneerimismeetod (Joonis 5). Selles meetodis kasutatakse tavaliselt 4 reaktsiooni. Selleks võetakse üht DNA ahelat, lisatakse praimeri ja radioaktiivselt märgistatud isotoopi, selleks et hiljem visualiseerida produkti. Igasse reaktsioonisse lisatakse polümeraasi 4 dNTP ja ühe dNTP tuletisena ­ ddNTP, mis piirab ehk inhibeerib transkriptsiooni. ddNTP-l puudub 3' otsa hüdroksüülrühm (esineb H) ning pärast seda, kui neid lülitakse ahela sisse süntees lõpeb. Igasse reaktsiooni pannakse erinevat ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP). Siis saadud fragmendid kantakse geeli peale ja teostatakse elktroforeesi, saadakse ,,sekveneerimise treppi", mille abil võib määrata nukleotiidset järjestust. Praegu see