Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum
inserdiga
Aktseptor plasmiid pEGDP-C
Reportergeen EGFP
Insert DST
Ümberkloneerimiseks kasutatavad restriktaasid BamHI ja SalI
Millistel tingimustel restriktsiooni reaktsioon läbi tuleks viia? Millise
pikkusega fragmendid saame ja mida kasutame ligeerimisel?
Double Digest soovitaks meie reaktsiooniseguks:
16
1x BamHI puhver
1x BamHI
2x SalI
Incubate at 37°C
Lõigates nii pSTBlue1 vektorit saame eraldada oma inserdi mis on kuskil 700bp ja
pEGFP-C vektori lõikamisel lõikame sealt kuskil 20 bp välja ja kasutame ülejäänut
pikka vektorit.
Millised katsed tuleb teostada, et saaksime kätte 1µg sellist GFP ja sinu
kloneeritud valku kodeerivat ekspressioonivektorit?
1