Molekulaarbioloogia protokoll
Tuubid
asetada tsentrifuugi nii, et tuubi ja kaant ühendav osa jääks väljapoole.
Tuubi selline asetus on vajalik selleks, et pärast fuugimist meile oleks selge kus kohas tuubis on sade.
(2) Eemalda supernatant sademe vastaspoolelt (ülemine vedeliku kiht, vt allpool olevalt skeemilt)
(maksimaalselt!)
ja suspendeeri bakterimass 200 l Lahuses I. Sega hoolikalt (vortex), et tekiks ühtlane suspensioon.
Kasuta vajadusel pipetti. Suspensiooni tegemiseks segame, kas näpu, Vortexi või puutikkuga.
(3) Lisa 400 l lahust II (rakud lüüsuvad, valgud ja nukleiinhapped denatureeritakse),
ning sega ettevaatlikult "end-over-end" stiilis (segajat mitte kasutada, see lõhub
kromosomaalset DNA-d, mis võib sel juhul hiljem kaasa sadeneda!). Aseta tuub
mõneks minutiks jääle.
(4) Lisa 300 l jääkülma lahust III (valgud ja kromosomaalne DNA