Molekulaarbioloogia aruanne
DNA lahutamisel
kasutatakse agaroosi (disahhariid, koosneb D-galaktoosist ja 3,6-anhüdro-L-galaktoosist).
1. päev: kasutatava agaroosgeeli kangust arvutatakse võttes arvesse oodatava produkti pikkust.
Meie kasutasime 1% geeli. Segasime kokku 100 ml TAE puhvrit, 1 gr agaroosi ning
kuumutasime mikholaineahjus sulamiseni. Jahtunud geelisegule lisasime1 μl EtBr, mida
kasutatakse DNA visualiseerimiseks. Valasime lahus geelialusele ning jätsime tarduma
järgmise praktikumini.
2. päev: lisasin PCR segule 4 μl 6x DNA värvi, et DNA nähtav oleks, ning kandsin kogu segu
TAE geelile (hambasse). DNA lahutamine toimub elektrivoolu toimel (100 V 15 min)
25.
26.
27.
28.
29.
30. Kuna minu produkt ei ole üldse geelipildil nähtav, võin järeldada, et midagi tegin valesti PCR
reaktsiooni teostamisel (nt. viga pipeteerimisel või mingi muu viga). Sain geelitükki teiste
plasmiidi ja praimeritega.
31. Plasmiid mEB1 pEGFP-N1, praimerid mEB1F ja mEB1R