Ensümoloogia protokoll
soolestiku fosfataasi ensüümikineetikat.
ALUSELISE FOSFATAASI AKTIIVSUSE MÄÄRAMINE
Aluselise fosfataasi aktiivsuse määramiseks kasutatakse kromogeenset substraati p-
nitrofenüülfosfaati (pNPP), mille hüdrolüüsi on võimalik kvantitatiivselt jälgida.
Ensüümreaktsiooni käigus hüdrolüüsitakse pNPP p-nitrofenooliks ja anorgaaniliseks
fosfaadiks. Protoneeritud vormis p-nitrofenool ei neela nähtavat valgust, kuid aluselises
keskkonnas deprotoneeritud vormis (p-nitrofenolaat) neelab intensiivselt valgust
lainepikkustel 400-415 nm (ekstinktsioonikoefitsient 410 = 18400 M-1cm-1). Kuivõrd pNPP
neelab ainult spektri ultraviolettpiirkonnas (vt joonis 2), saab spektrofotomeetri abil jälgida p-
nitrofenolaadi tekkimist ning määrata reaktsiooni toimumise kiiruse.
Antud töös kasutatakse peatatud reaktsiooni meetodit, kus reaktsioon lõpetatakse
NaOH lisamise teel. Tekkinud produkti hulga/kontsentratsiooni arvutamiseks määratakse
annaabi.ee 
