Ensümoloogia protokoll
Ensüümreaktsiooni käigus hüdrolüüsitakse pNPP p-nitrofenooliks ja anorgaaniliseks
fosfaadiks. Protoneeritud vormis p-nitrofenool ei neela nähtavat valgust, kuid aluselises
keskkonnas deprotoneeritud vormis (p-nitrofenolaat) neelab intensiivselt valgust
lainepikkustel 400-415 nm (ekstinktsioonikoefitsient 410 = 18400 M-1cm-1). Kuivõrd pNPP
neelab ainult spektri ultraviolettpiirkonnas (vt joonis 2), saab spektrofotomeetri abil jälgida p-
nitrofenolaadi tekkimist ning määrata reaktsiooni toimumise kiiruse.
Antud töös kasutatakse peatatud reaktsiooni meetodit, kus reaktsioon lõpetatakse
NaOH lisamise teel. Tekkinud produkti hulga/kontsentratsiooni arvutamiseks määratakse
optiline tihedus lainepikkusel 410 nm.
1)ENSÜÜMI KONTSENTRATSIOONI (E) MÕJU REAKTSIOONI
KIIRUSELE (v)
Selles katses varieerisime fosfataasi kontsentratsiooni, teised parameetrid (substraadi
kontsentratsioon, pH ja temperatuur) hoidsime konstantsetena.
annaabi.ee 
