"nipsutasin" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

Lõikasin UV-laual skalpelliga minu bänd välja. Proovisin seda tega võimalikult hoolikalt, et tükk oleks võimalikult väike ja sisaldaks kogu DNAd. 2. Eelnevalt kaalusin tuubi (1,01g), panin selle tuubi sisse oma geelitükk, ning kaalusin neid kokku. Sain, et lõiku kaal on 1,18g – 1,01g = 0,17g. 3. Lisasin 0,1g geeli kohta 0,3 ml, ehk 17*0,3 = 0,51ml = 510 µl ADPd (Agarose Dissolving Buffer), mis lahustab geeli, ning panin inkubeerida 55 C 5 juures geeli täeliku sulamiseni. Vahepeal nipsutasin tuubi, et kiirustada sulamist. 4. DNA – geeli – puhveri segu pipeteerisin Zymo-SpinTM kolonni (mis oma korda koosneb kolonnist ja kogumistopsist. Kolonn sisaldab ränifiltri, läbi mille me laseme oma segu jooksma. DNA seostub räniiksiidi osakestega, sellega ta ei saata kogumistopsi, vaid jääb kolonni filtri peale. Kolonni saagis minu DNA lõigule on vahemikus 70-90%) ja tsenrifugeerisime 30sek ja viskasin läbivoolatud puhver välja. 5