"mq3" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

Rakud muutuvad vastupidavamaks. Antud juhul fikseerimiseks kasutame PFA lahust, kuid saab fikseerida ka teiste meetoditega, kuid PFA on üks õrnemastest ja ei muutu valke nii tugevalt nagu näiteks atsetoon. Fikseerimiseks on vaja valmistada lahused: 1) Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10 ml o 0,4 g PFA puru o 1 ml 10x PBSi o 9 ml vett 2) 1x PBS, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ3 3) PBS-Tween: 1x PBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ o 50 μl Tween 4) Permeabiliseerimislahus: 50 mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 1 ml. Raku membraan permeabiliseeritakse ehk muudetakse läbilaskvaks detergendiga (Triton-X-100, saponiin, jt.), et antikehad rakku ja eelkõige rakutuuma pääseksid. See etapp on oluline siis, kui meil on vaja vaadata mingi valgu ekspressiooni raku sees. Kui me vaatame