"miniprepi" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum

Selleks lisan reaktsioonisegule E.coli kompetentseid rakke, inkubeerin 15- 30 minutit jääl ja samalajal valan petri tassi LB söötme, kanamütsiili. 30 minuti järel teen kuumašoki 42 kraadi juures 50 sekundit. Lisan LB söödet ja inkubeerin 37 kraadi juures. Kannan bakterid petri tassile ja jätan nad kasvama. 5. Valin koloonia ja kontrollin kas ligatsioon töötas. Panen koloonia vedelsöötmesse 16ks tunniks kasvama. Seejärel teen miniprepi ehk tsentrifuugin bakterid põhja , eemaldan supernatandi, lisan E1 lahuse, lisan E2 lahuse, Lisan E3 lahuse, tsentrufuugin. Tõstan supernatandi uude tuubi ja lisan isopropanooli. See sadestab ja kallame supernatandi ära. Siis peseme sooladest puhtaks etanooliga. Tsentrifuugime. Kuivatame. Ja lisame vett. 6. Nüüd meil peaks olema siis õige plasmiid. Kontrollime seda restriktsaasidega lõigates ja pipeteerime segu agaroosgeeli hambasse.