"minipreparatsioonis" - 1 õppematerjal

Molekulaarbioloogia protokoll

Selleks pipeteeri 10 l 1 x TBE foreesipuhvrit (lilla) + 2 l PCR tuubist kokku 12 l, kanda kõik geelile. Geelile lisada kindlasti molekulmassi marker ja kontroll PCR (amplifikatsioon tühjalt pBS SK+ plasmiidilt). Interpreteeri tulemus. Saadud rekombinantsed plasmiidid on valmis inserdi sekveneerimiseks T7 praimeri ja "kit"i abil (järgmises praktikumis). Restriktsiooni tulemused: Minu minipreparatsioonis tuli välja 2 inserti. Üks umbes 2,5 kb pikkune ja teine umbes 6 kb pikkune. Võib olla see on tingitud sellega, et ensüüm Cfr421 ei töötanud väga hästi. 10 Lisaülesanded: 4.1) Leia Wallace reegli abil (4x GC + 2x AT) T3 ja T7 praimerite sulamistemperatuurid. Kui "annealing" või hübridisatsiooni temperatuur peab praimeri sulamistemperatuurist olema ~5 oC madalam, siis milline on sobiv temperatuur antud PCR reaktsiooniks?