Molekulaar- ja rakubioloogia
5. DNA minipreparatsioon:
a. Bakterikoloonia on bakterite kogum, mis tekib ühe bakteriraku paljunemisel.
b. Petri tassil oli 25 kolooniat, neist 4 valged. Vedelsöötmesse panin kasvama ühe
valge koloonia, kuna koloonia valge värv näitab, et nendes rakkudes on
plasmiid, milles lacZ operoni lugemisraam on inserdi poolt rikutud vastasel
korral sünteesitaks rakkudes dikloro-dibromo-indigod ning kolooniad oleks
sinised.
c. Minipreparatsiooni protokoll:
1. Võtta 1,5 ml epsis üleöö kasvanud bakterikultuur
2. Tsentrifuugi bakterid põhja 2 min maksimumpööretel toatemperatuuril
3. Eemalda ettevaatlikult pipetiga sööde (supernatant ehk selge lahus sademe
kohal) eppendorfi põhja on kogunenud rakusade.
4. Re-suspendeeri pellet (väike hunnik rakke epsi põhjas) 0,2 ml-s E1 lahuses
Ole hoolas: lahusesse jäävad klämbud ei lüüsu järgmises etapis täielikult ja