"mikroobisuspensiooni" - 1 õppematerjal

Meditsiinilise mikrobioloogia praktikum

vahetult kliinilise materjali korral. Üks lihtsamaid DNA vabastamise meetodeid on bakterite termiline töötlemine. Kuumuse mõjul bakteri sein puruneb ja DNA vabaneb ümbritsevasse keskkonda. 1) Valmistada kuumutamiseks bakterite suspensioon 1,5 ml Eppendorfi katsutis. Selleks pipeteerida automaatpipetiga Eppendorfi katsutisse 10 µl steriilset destilleeritud vett. Lisada steriilse pulgaga Petri tassilt 1 koloonia, segada vorteksil kuni kaovad kõik nähtavad tükid. 2) Mikroobisuspensiooni kuumutamine DNA vabastamiseks. Asetada valmistatud bakterite suspensioon PCR masinasse, kuumutada suspensioone 950 C juures 10 min jooksul (spetsiaalne programm). II RAPD-PCR REAKTSIOONI ETAPP – VAHETU PCR REAKTSIOONI TEOSTAMINE 3) PCR segu valmistamine. PCR reaktsiooni toimumiseks on vajalikud järgmised komponendid: sihtmärk DNA (bakterilt), spetsiifilised praimerid , Taq-polümeraas, nukleotiidid, puhvrid ja soolad.