Molekulaar- ja rakubioloogia
Head kompetendid on näiteks 10 8, see tähendab, et 1ng-
ga transformeeritud tass annab 100 000 kolooniat, mida on ilmselgelt ülelugemiseks
liiga palju, siis kasutatakse transformeerimisel veel väiksemaid koguseid (juba 10pg
plasmiidiga transformeerimisel tekib 1000 kolooniat).
c) Transformeerimise protokoll:
1. Inaktiveeri ligaas inkubeerides eppendorfi 10 min 65 °C vajalik, et lõpetada
vektori ja inserdi ligeerimine ja hoida ära soovimatud ligeerimisprotsessid segus.
2. Transformeerimiseks võta -80°C juurest 10 minutiks jääle sulama kompetentsed
rakud. jääs hoidmine on vajalik, kuna külmutatud rakud on väga tundlikud kõrge
temperatuuri suhtes.
3. Transformeermiseks võta 20 l kompetentseid rakke ning lisa ligatsioonisegule.
4. Inkubeeri 30 min jääl. vajalik efektiivsuse suurendamiseks keemiliselt
kompetentseks muudetud rakkude puhul, kuna külmades tingimustes kinnitub DNA
rakuseinale
annaabi.ee 
