Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum
on homogeenne. Seejärel pipeteerime kõik segu ränikolonni, DNA jääb
räni külge. Tsentrifuugime. Valame kogumistopsist puhvri ära ja peseme 2
korda pesupuhvriga. Seejärel lisame elueerimispuhvrit ja tsentrufuugime
uuesti. Nüüd saime tulemusekt inserdi ja aktseptorplasmiidi.
3. Järgneb ligatsioon. Võtame vektorit ja inserti suhtes 1:3 ja lisame segule T4
DNA ligaasi ja ligeerimispuhvrit ja MQ’d. Ligeerime 4 kraadi juures üleöö.
Kõrvale teeme ka kontroll-proovi mis sisaldab ainult vektor+ligaasi +
puhver, ilma inserdita.
4. Järgmiseks sisestame plasmiidi bakterisse selle paljundamise eesmärgil.
Selleks lisan reaktsioonisegule E.coli kompetentseid rakke, inkubeerin 15-
30 minutit jääl ja samalajal valan petri tassi LB söötme, kanamütsiili. 30
minuti järel teen kuumašoki 42 kraadi juures 50 sekundit. Lisan LB söödet
annaabi.ee 
