Veterinaarne geneetika
* puhvrit.
Põhietapid:
1. DNA denaturatsioon üheahelaliseks (95 kraadi)
2. praimerite seondumine (50 kraadi)
3. DNA elongatsioon (72 kraadi).
Tsükliline protsess – kokku 30 tsüklit. Uurimismaterjal: veri, karvad (karvasibul), sperma,
limaskesta rakud, koeproov.
4. 8. Milleks kasutatakse kvantitatiivset polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR), milliseid
põhikomponente selleks vajatakse, millised on RT-PCRi põhietapid?
* Patogeenide (sh viiruste) kvantiteerimine ja identifitseerimine
* geeniekspressiooni kvantiteerimine
* DNA kahjustuste mõõtmine
* proovide valideerimine
* genotüpiseerimine (geenikaardi loomine).
Lisatakse fluorestseeruvat värvainet (SYBR Green). Termotsükleril on fotodetektorid
fluorestsentsi mõõtmiseks.
Seatakse fluorestsentsi intensiivsuse lävi ülevalpool baasfluorestsentsi (nii et mõõtmine
toimuks eksponentsiaalses faasis). Ct on lävetsükkel – tsükli number, mitu korda fluorestsents