Molekulaar- ja rakubioloogia
DNA ja PEI.
• Esimeses epsis segada 25 μl DMEMi ja 2 μl pEGFP-C1d (250 ng/μl)
kontrollplasmiid – sisaldab pEGFP, ehk kui transfekteerimine õnnestub,
rakud peavad flouriseerima flouristent mikroskoobi all.
• Teises epsis segada 25 μl DMEMi ja 0,5 μl pEGFP/FoxO3a (conc 1000
ng/μl) uuritav konstrukt. Ehk plasmiidid, mis korrefivad EGFP ja, mis
sisaldab FoxO3a geeni kodeeriva järjestuse. FoxO3a on transkripstiooni
faktor, valk on reguleerib apoptoosi ja kaitseb raku oksüdatiivse stressi eest.
On näidatud, et valgu madal ekspessioon on seotud tumorgeneesiga.
• Kolmandas epsis segada 50 μl DMEMi ja 2 μl PEI lahust
Pärast agada segu kolmandast epsist võrdselt DNA segudele (52:2=26 μl kaupa),